Valutazione dello stato di benessere in riproduttori di Venerupis philippinarum e Venerupis decussata e studio dei primi stadi di sviluppo

The aim of this work was to study: 1) the welfare in breeders of clam (Venerupis philippinarum and Venerupis decussata) using different biomarkers (cortisol, stress oxidative biomarkers, detoxification enzymes); 2) the reproduction and the larval development of these molluscs. The first study evaluated the variation of cortisol in clams subjected to the following stress conditions: anoxia and fasting. The study evidenced a tendency in the increase of cortisol in the animals under anoxia and a decrease in the animals under fasting conditions. In a successive work was evaluated the general morphology and the oxidative stress response in clams sampled at different sites of the Venice Lagoon. The histological evaluation revealed the presence of the parasite Perkinsus olseni in animals from all sites, with an intense immunitary response of the hosts. The hemocytes, that participate at the infiammatory response, showed an intense immunopositivity to several antibodies of the oxidative stress. The bivalve molluscs are often used as biondicator of environmental pollution, so we decided to evaluate the expression of two genes involved in the detoxification process of xenobiotics, in animals treated with different concentrations of benzo(a)pyrene. The expression of GSTr evidenced a significant increase of mRNA in the animals treated with the highest dose, but the analysis of CYP4 expression did not evidence differences among treatments. In treated animals, the histopatological analysis revealed an increase of a particular type of cells involved in the detoxification process of molluscs called brown cells. In the second part of the work we investigated about the reproduction of these bivalves using an histological approach to evaluate the gonad maturation and a radioimmunoassay method to analyse the sex steroids variation. The steroids progesterone, 17β-estradiol and testosterone resulted involved in the gonad maturation of the clams. The histological analysis revealed a different time of maturation of the two species of clams. The study of the larval development revealed useful information about the larval management.

Lo scopo del presente lavoro è stato quello di valutare: 1) lo stato di benessere in riproduttori di vongola Venerupis philippinarum e Venerupis decussata con l’utilizzo di biomarcatori (cortisolo, marcatori di stress ossidativo, enzimi di detossificazione); 2) la riproduzione e i primi stati larvali di questi molluschi. La prima sperimentazione ha valutato la variazione del cortisolo in vongole sottoposte a due tipi di stress: anossia e digiuno. E’ stata evidenziata una tendenza all’aumento del cortisolo negli animali sottoposti ad anossia e una diminuzione negli animali a digiuno. In un successivo lavoro sono stati valutati la morfologia generale e la risposta allo stress ossidativo in vongole campionate in vari siti della Laguna di Venezia. L’analisi istologica ha rivelato la presenza del parassita Perkinsus olseni negli animali di tutti i siti con un intensa risposta immunitaria da parte dell’ospite. Gli emociti implicati nella risposta immunitaria, hanno mostrato una immunopositività agli anticorpi dello stress ossidativo. Nell’intento di individuare dei marcatori di stress, visto che i molluschi bivalvi sono spesso utilizzati come bioindicatori dell’inquinamento ambientale, si è deciso di valutare l’espressione di alcuni geni (CYP4-GSTr) implicati nei processi di depurazione degli xenobiotici, in animali sottoposti a differenti dosi di benzo(a)pirene. L’analisi dell’espressione del GSTr ha mostrato un aumento significativo dell’mRNA negli animali sottoposti alla dose maggiore, ma l’analisi dell’espressione del CYP4 non ha evidenziato differenze tra i trattamenti. Su questi animali, l’analisi istopatologica ha evidenziato, negli animali trattati, un incremento di un tipo particolare di cellule coinvolte nei processi di detossificazione nei molluschi chiamate brown cells. Per quanto riguarda lo studio sulla riproduzione di questi bivalvi, è stata condotta un’analisi istologica per valutare la maturazione gonadica e una analisi radioimmunologica per determinare la variazione degli steroidi sessuali in animali pescati in natura e stabulati presso l’impianto di Veneto Agricoltura alle condizioni previste dal protocollo dell’Azienda per la produzione di larve di vongola, al fine di ottenere informazioni per eventualmente migliorarlo. Gli steroidi sessuali testosterone, estradiolo e progesterone sono risultati essere implicati nello sviluppo gonadico delle vongole. L’analisi istologica ha evidenziato differenti tempi di maturazione delle gonadi delle due specie di Venerupis analizzate. Lo studio sullo sviluppo larvale ha permesso di fornire informazioni utili sui tempi di sviluppo dei primi stadi larvali.