Caratterizzazione delle AOPP (Advanced Oxidation Protein Products) come indicatori di stress ossidativo e processi infiammatori nella bovina

The aim of this study was to characterize markers of oxidation of proteins in cattle, developing the assay method of AOPP (advanced oxidation protein products). Using standard commercial proteins (Bovine serum Albumin, bovine g-Globuline), oxidations In vitro were performed with chlorinated oxidant (hypochlorous acid) and hydroperoxide (cumene hydroperoxide) determining the relationship between AOPP and carbonyl groups by spectrophotometric and Western blotting analysis. The conformational changes of the standards were observed by one-dimensional electrophoresis kept in non-reducing conditions. In the second part of this project, we have studied the relationship between inflammation indicators and AOPP in both healthy cow and in animals with inflammatory processes, supporting the hypothesis that AOPP are specific indicators of protein oxidation by chlorinated oxidants produced by neutrophilis. The third part of the work has focused on the production of oxidative standard protein (AOPP-BSA) for the development of ELISA systems to detect autoantibodies directed against epitopes of oxidized proteins.

Lo scopo del presente studio è stato quello di caratterizzare indicatori dell’ossidazione delle proteine nella specie bovina, sviluppando la metodica del dosaggio delle AOPP (advanced oxidation protein products). A partire da standard proteici commerciali (Albumina bovina e g-Globuline bovine) sono state eseguite delle ossidazioni in vitro con ossidante clorurato (acido ipocloroso) ed idroperossido (Cumene idroperossido) determinando la relazione tra AOPP e gruppi carbonilici tramite analisi spettrofotometriche e densitometriche tramite Western blotting. Le modificazioni conformazionali degli standard sono state osservate mediante elettroforesi monodimensionali mantenute in condizioni non riducenti. La seconda parte del progetto sono state studiate le relazioni tra indicatori del processo infiammatorio e le AOPP in animali sani e/o con processi infiammatori in atto, avvalorando l’ipotesi che le AOPP siano degli indicatori specifici dell’ossidazione proteica da parte di ossidanti clorurati di origine neutrofilica. La terza parte del lavoro si è focalizzata sulla produzione di standard proteici ossidati (AOPP-BSA) per la messa a punto di sistemi ELISA per l’individuazione di autoanticorpi diretti contro epitopi ossidati delle proteine.