VALUTAZIONE QUANTITATIVA DI MALATTIA MINIMA NEL MIDOLLO E NEL SANGUE PERIFERICO DI PAZIENTI CON RABDOMIOSARCOMA MEDIANTE TECNICA DI REAL TIME PCR

Introduzione e scopo. Il Rabdomiosarcoma (RMS), tumore a piccole cellule rotonde blu, è il più comune sarcoma dei tessuti molli pediatrici. In circa 20% dei casi si presenta con malattia diffusa alla diagnosi e le sedi più frequentemente coinvolte sono polmoni, linfonodi e midollo osseo (BM). Attualmente, l’infiltrazione midollare di cellule di RMS è rilevata dall’ analisi morfologica dell’ aspirato midollare e/o delle biopsie osteo-midollari. Questi metodi tuttavia non riescono a rilevare un’infiltrazione neoplastica inferiore al 5%. Sulla base delle caratteristiche cliniche e biologiche del RMS, abbiamo standardizzato un metodo quantitativo di RT-PCR basato sul marcatore RMS-specifico MyoD1, al fine di studiare la malattia minima disseminata(MMD) in bambini con RMS. Materiali e metodi. Abbiamo condotto studi di RT-PCR quantitativa relativa per il gene MyoD1 mediante tecnologia TaqMan. I primers specifici per MyoD1 e la sonda sono stati individuati usando il software specifico Primer Express (Applied Biosystems). GUS è stato utilizzato come gene housekeeping ossia come controllo endogeno per ogni campione. Risultati. Abbiamo studiato il BM alla diagnosi di 39 pazienti affetti da RMS. La metodica è di facile applicazione ed unisce l’alta sensibilità alla specificità. MMD era positiva in 17/39 pazienti. I livelli di espressione di MyoD1 in 7/17 campioni, positivi anche mediante RT-PCR qualitativa, hanno mostrato valori di Ct che variavano in un range da 21 a 27, mentre in 10 casi, negativi in RT-PCR, il valore di Ct era superiore a 35. In 14 pazienti abbiamo potuto studiare la malattia minima anche nel sangue periferico. 10/14 sono risultati positivi con valori di Ct in un range da 35 a 38, indipendentemente dalla positività midollare. Conclusioni. Questi risultati preliminari suggeriscono che il coinvolgimento midollare alla diagnosi è discretamente frequente in pazienti con RMS e che la MMR può essere rilevata, anche se a livelli molto bassi, nel sangue periferico indipendentemente dall’infiltrazione midollare.