(EN)Disclosed is a fully human antibody specifically inhibiting a connexin 26. The antibody is a recombinant immunoglobulin having the structure of scFv-Fc. scFv refers to a single-chain antibody comprising a heavy chain variable region and a light chain variable region, wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region is set forth in SEQ ID NO: 1 and the amino acid sequence of the light chain variable region is set forth in SEQ ID NO: 2. Fc refers to a constant region. An amino acid sequence from the 41st to the 56th amino acids in an extracellular region of human connexin 26, i.e., KEVWGDEQADFVCNTL, is used as an antigen. The invention is obtained by employing a single-chain antibody phage display library and a screening technique. A biochemical analysis and an immunofluorescent identification of the antibody indicated that the antibody specifically recognizes the connexin 26 and inhibits an activity of a hemichannel formed by the connexin 26. An animal test showed that the antibody exerted a significant inhibitory effect on the activity of a hemichannel in a murine cochlear tissue slice. Therefore, the antibody can be used for the treatment of a disease associated with connexin mutation. (FR)La présente invention concerne un anticorps entièrement humain inhibant en particulier une connexine 26. L'anticorps est une immunoglobuline recombinée possédant la structure de scFv-Fc. scFv désigne un anticorps monocaténaire comprenant une région variable de chaîne lourde et une région variable de chaîne légère, la séquence d'acides aminés de la région variable de chaîne lourde étant présentée dans SEQ ID NO: 1 et la séquence d'acides aminés de la région variable de chaîne légère étant présentée dans SEQ ID NO: 2. Fc désigne une région constante. Une séquence d'acides aminés entre le 41ème et le 56ème acide aminé dans une région extracellulaire de la connexine 26 humaine, c'est-à-dire, KEVWGDEQADFVCNTL, est utilisée comme antigène. L'invention est obtenue par l'utilisation d'une banque d'expression phagique d'anticorps monocaténaires et d'une technique de criblage. Une analyse biochimique et une identification par immunofluorescence de l'anticorps ont indiqué que l'anticorps reconnaît spécifiquement la connexine 26 et inhibe une activité d'un demi-canal formé par la connexine 26. Une expérience sur des animaux a montré que l'anticorps exerçait un effet inhibiteur notable sur l'activité d'un demi-canal dans une lamelle de tissu cochléaire murin. Par conséquent, l'anticorps peut être utilisé dans le traitement d'une maladie associée à une mutation de la connexine

Fully human antibody specifically inhibiting connexin 26

MAMMANO Fabio
Membro del Collaboration Group
;
ZONTA Francesco
Membro del Collaboration Group
2017

Abstract

(EN)Disclosed is a fully human antibody specifically inhibiting a connexin 26. The antibody is a recombinant immunoglobulin having the structure of scFv-Fc. scFv refers to a single-chain antibody comprising a heavy chain variable region and a light chain variable region, wherein the amino acid sequence of the heavy chain variable region is set forth in SEQ ID NO: 1 and the amino acid sequence of the light chain variable region is set forth in SEQ ID NO: 2. Fc refers to a constant region. An amino acid sequence from the 41st to the 56th amino acids in an extracellular region of human connexin 26, i.e., KEVWGDEQADFVCNTL, is used as an antigen. The invention is obtained by employing a single-chain antibody phage display library and a screening technique. A biochemical analysis and an immunofluorescent identification of the antibody indicated that the antibody specifically recognizes the connexin 26 and inhibits an activity of a hemichannel formed by the connexin 26. An animal test showed that the antibody exerted a significant inhibitory effect on the activity of a hemichannel in a murine cochlear tissue slice. Therefore, the antibody can be used for the treatment of a disease associated with connexin mutation. (FR)La présente invention concerne un anticorps entièrement humain inhibant en particulier une connexine 26. L'anticorps est une immunoglobuline recombinée possédant la structure de scFv-Fc. scFv désigne un anticorps monocaténaire comprenant une région variable de chaîne lourde et une région variable de chaîne légère, la séquence d'acides aminés de la région variable de chaîne lourde étant présentée dans SEQ ID NO: 1 et la séquence d'acides aminés de la région variable de chaîne légère étant présentée dans SEQ ID NO: 2. Fc désigne une région constante. Une séquence d'acides aminés entre le 41ème et le 56ème acide aminé dans une région extracellulaire de la connexine 26 humaine, c'est-à-dire, KEVWGDEQADFVCNTL, est utilisée comme antigène. L'invention est obtenue par l'utilisation d'une banque d'expression phagique d'anticorps monocaténaires et d'une technique de criblage. Une analyse biochimique et une identification par immunofluorescence de l'anticorps ont indiqué que l'anticorps reconnaît spécifiquement la connexine 26 et inhibe une activité d'un demi-canal formé par la connexine 26. Une expérience sur des animaux a montré que l'anticorps exerçait un effet inhibiteur notable sur l'activité d'un demi-canal dans une lamelle de tissu cochléaire murin. Par conséquent, l'anticorps peut être utilisé dans le traitement d'une maladie associée à une mutation de la connexine
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